ライソゾーム病は、細胞内の老廃物を代謝する際に必要な酵素の活性が低下しているために起こる遺伝病であるが、根本的な治療法は確立されていなかった。近年になり、患者のライソゾーム(老廃物を代謝する細胞内小器官)に欠損している酵素を細胞外から導入し、蓄積する老廃物を分解するという酵素補充療法が提唱された。その導入には、酵素の末端にマンノース-6-リン酸残基を有する糖鎖構造が重要である。補充療法に用いられる酵素は現在主に動物細胞で作られているが、培養に牛血清を用いるため生産コストが高くまた感染症の心配もある。したがって補充療法用酵素を安価で大量にかつ効率良く供給するために、我々は酵母を宿主としてマンノース-6-リン酸残基を有する酵素を生産させることを検討した(図1)。モデルとしてライソゾーム病の一種であるファブリー病の治療薬となるヒトα-ガラクトシダーゼ(α-GalA)を発現させた。
リン酸含有糖鎖の割合を多くするためMNN4遺伝子が恒常的に発現した株を選び、酵母に特異的な外糖鎖生合成に関わる遺伝子(OCH1, MNN1)を破壊した。得られた株にα-GalA遺伝子を導入した。生産されたα-GalA中の糖鎖にはマンノースリン酸を付加した酸性糖鎖が多く含まれていた。しかしながら酵母の酸性糖鎖はリン酸とマンノースがジエステル結合しているため、そのままではマンノース-6-リン酸レセプターとの結合効率が低い。そこでα-マンノシダーゼ生産菌を新規に単離し、この酵素を用いてin vitroでα-GalAの糖鎖のリン酸に付加したマンノースを切断させることに成功した。この酵素を用いて、ファブリー病患者由来の細胞への取り込みを測定したところ、α-GalAは細胞内に取り込まれ、蓄積していた老廃物(CTH)をほぼ完全に分解した(図2)。
このシステムを使うことにより、ファブリー病のみならず、他の多くのライソゾーム病の治療薬を安価に生産できると考えられる。




































